制備柱主要應用在植物化學(xué)、藥物合成、生物化學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品的提取及純化工作中。不同的工作領(lǐng)域中組分的制備和純化量的差異較大。在生物技術(shù)領(lǐng)域中，酶的分離是μg級；在天然產(chǎn)物化學(xué)和合成化學(xué)領(lǐng)域中，為應對未知成分定性鑒別、結構測定、生物活性測試等要求，需要純化若干mg級的高純物；在藥品學(xué)測試中，需要g級的標準品和對照品；在工業(yè)級提純中，目標產(chǎn)物工業(yè)化生產(chǎn)往往需要kg級的分離純化。

 

　　下面咱們來(lái)聊一聊如何使用制備柱能保持其柱效：

 

　　1、保存時(shí)應將柱內充滿(mǎn)乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過(guò)夜或更長(cháng)時(shí)間。

 

　　2、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使其從高處掉下都會(huì )影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì )沖動(dòng)柱內填料，因此在調節流速時(shí)應該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉動(dòng)不能過(guò)緩(如前所述)。

 

　　3、使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時(shí)應更換濾片或將其取出進(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷，死體積增大。在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開(kāi)柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1-2mm高度再把柱內填料整平。然后用適當溶劑濕潤的固定相填滿(mǎn)色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復到新柱的水平。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5-30mm)，可以起到保護、延長(cháng)柱壽命的作用。采用保護柱會(huì )損失一定的柱效，這是值得的。通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2-9范圍內使用。柱子使用一段時(shí)間后，可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著(zhù)在柱頂的填料上。

 

　　4、新的產(chǎn)品在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時(shí)也可補加填料使柱效恢復。每次工作完后，應用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線(xiàn)平衡。當采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素的化合物可能會(huì )腐蝕不銹鋼管道，不宜長(cháng)期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應每隔4-5天開(kāi)機沖洗15分鐘。