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國產(chǎn)液相色譜柱的使用維護以及注意事項的簡(jiǎn)單分析

瀏覽次數:1820發(fā)布日期:2017-08-11
     國產(chǎn)液相色譜柱的使用和維護注意事項
    國產(chǎn)液相色譜柱的正確使用和維護十分重要,稍有不慎就會(huì )降低柱效,縮短使用壽命甚至損壞,在色譜操作過(guò)程中,需要注意下列問(wèn)題,以維護色譜柱。
    ①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動(dòng),溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì )影響柱內的填充狀況;柱壓突然升高或降低也會(huì )沖動(dòng)柱內填料,因此在調節流速時(shí)應該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)的轉動(dòng)不能過(guò)緩。
    ②應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然?/div>
    ③一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去柱內的雜質(zhì),否則反沖會(huì )迅速降低柱效。
    ④選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預柱,分析柱是鍵合硅膠,預柱為硅膠,可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預先被硅膠"飽和",避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
    ⑤避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱骨需要對樣品進(jìn)行預處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護柱.國產(chǎn)液相色譜柱一般是填有固定相的短柱.保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。
    ⑥經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內的雜質(zhì),在進(jìn)行清洗時(shí),對流路系統中流動(dòng)相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡,每種流動(dòng)相的體積應是柱體積的20倍左右,即常規分析需要50-75ml。下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,作為參考:正相硅膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷(或氯仿)和甲醇依次沖洗,然后再以相反順序依次沖洗,所有溶劑都必;須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì),已烷使硅膠表面重新活化。
    反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗,再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動(dòng)?相不含緩沖液,那么可以省略zui后一步用水沖洗。一氯甲烷能洗支殘留的非極性雜質(zhì)。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混全溶液能除去類(lèi)脂。有時(shí)也注射二甲亞砜數次。此外,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗能除去蛋白質(zhì)污染。
    陽(yáng)離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗,陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗,除去交換性能強的鹽,然后用水、甲醇、水依次沖洗。
    ⑦保存色譜柱時(shí)應將柱內充滿(mǎn)乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過(guò)夜或更長(cháng)時(shí)間。
    ⑧國產(chǎn)液相色譜柱使用過(guò)程中,如果壓力升高,一種可能是燒結濾片被堵塞,這時(shí)應更換濾片或將其取出進(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)入柱內,使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現塌陷,死體積增大。
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